分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的染料主要涉及到核酸染料和蛋白質(zhì)染料,核酸染料主要有EB(溴化乙錠,高致癌性),goldview,sybr green(實(shí)時(shí)定量PCR時(shí)常用染料)這些染料可以和核酸雙鏈分子特異性結(jié)合發(fā)出強(qiáng)熒光而被檢測(cè)到,蛋白質(zhì)染料最常用的是考馬斯亮藍(lán) R-250,硝酸銀,其中硝酸銀有時(shí)也用于核酸染色。
檢測(cè)過程需按檢測(cè)方法和作業(yè)指導(dǎo)書操作。當(dāng)測(cè)試過程出現(xiàn)異?,F(xiàn)象應(yīng)詳細(xì)記錄。并及時(shí)采取措施處置。
最初人們發(fā)現(xiàn)很多物質(zhì)都具有顏色,例如Mn04-為紫紅色,F(xiàn)e3+為黃色,當(dāng)含有這些物質(zhì)的溶液濃度改變時(shí),溶液顏色的深淺度也就隨著改變。溶液越濃顏色越深,溶液越稀顏色越淺,因此利用比較溶液顏色深淺的方法來確定溶液中有色物質(zhì)的含量,這種方法稱為“目視比色法”,隨后人們又認(rèn)識(shí)到溶液的顏色是由于對(duì)光的選擇性吸收而產(chǎn)生的,可以利用濾光片和光電池客觀的測(cè)量溶液的濃度,從而出現(xiàn)了“光電比色法”。隨著近代測(cè)試儀器的發(fā)展,用分光光度計(jì)代替比色計(jì),出現(xiàn)了分光光度法。
配制好的試劑應(yīng)及時(shí)盛入試劑瓶,試劑瓶上必須有標(biāo)明名稱、濃度和配制人,配制日期,復(fù)核人,復(fù)核日期的標(biāo)簽,有效期限。
原代細(xì)胞由于轉(zhuǎn)染效率低這個(gè)問題,應(yīng)用受到了限制。自從腺病毒誕生后,因?yàn)槠涑瑥?qiáng)的感染能力,克服了原代細(xì)胞難感染的問題,使得原代細(xì)胞的使用變得更加簡(jiǎn)單。由于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)后,很多時(shí)候需要做到動(dòng)物體內(nèi),由于原代細(xì)胞有體內(nèi)細(xì)胞的特點(diǎn),為了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果更加趨向一致性,因此用原代細(xì)胞來進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)更值得考慮。
將所需的培養(yǎng)基,胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺(tái)面內(nèi),點(diǎn)燃酒精燈,將培養(yǎng)基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后,再將瓶口對(duì)準(zhǔn)在酒精燈上消毒2-3次,旋開瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋,分別放于酒精燈的兩側(cè)。特別是將培養(yǎng)基瓶放于斜架上,瓶口對(duì)準(zhǔn)酒精燈,且放在距離酒精燈最近的位置,瓶蓋置于酒精燈的另一側(cè)。
生長(zhǎng)在固體培養(yǎng)基上的霉菌菌絲可分為三部分:①營(yíng)養(yǎng)菌絲:深入的培養(yǎng)基內(nèi),吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的菌絲;②氣生菌絲:營(yíng)養(yǎng)菌絲向空中生長(zhǎng)的菌絲;③繁殖菌絲:部分氣生菌絲發(fā)育到一定階段,分化為繁殖菌絲,產(chǎn)生孢子。
嚴(yán)格進(jìn)行動(dòng)物皮膚消毒,使用三套器械取材。新生動(dòng)物皮膚先用2%碘酒液消毒,成年鼠先用3%~5%碘酒液消毒后用75%酒精消毒。
微生物實(shí)驗(yàn)室及無菌操作臺(tái)開紫外燈滅菌1小時(shí),關(guān)閉后至少半小時(shí)才進(jìn)入無菌室,我們一般1小時(shí)后才進(jìn)去。因?yàn)樽贤鉄粽丈浜笥袣埩簟?/p>
革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中最廣泛使用的一種鑒別染色法。1884 年 由丹麥醫(yī)師 Gram 創(chuàng)立。方法是先將細(xì)菌用結(jié)晶紫染色,加媒染劑(增加染料和 細(xì)胞的親和力)后,用脫色劑(酒精或丙酮)脫色,再用復(fù)染劑染色。如果細(xì)菌 不被脫色而保存原染液顏色者為革蘭陽性菌(G+);如被脫色,而染上復(fù)染液的顏 色者為革蘭陰性菌(G-)。此染色法可將所有具有細(xì)胞壁的細(xì)菌分為兩大類:革蘭 陽性菌和革蘭陰性菌。