分子生物學是指在分子水平上研究生命現(xiàn)象的科學,從生物大分子(核酸、蛋白質)的結構、功能和生物合成等方面來闡明各種生命現(xiàn)象的本質。研究內(nèi)容包括各種生命過程,如光合作用、發(fā)育的分子機制、神經(jīng)活動的機理、癌的發(fā)生等。
細胞中的DNA合成有兩條途徑:一條途徑是生物合成途徑(“D途徑”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,為DNA分子的合成提供原料。在此合成過程中,葉酸作為重要的輔酶參與這一過程,而HAT培養(yǎng)液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物,可以阻斷DNA合成的“D途徑”。
組蛋白是構成真核生物染色體的基本結構蛋白,富含帶正電荷的Arg和Lys等堿性氨基酸,等電點一般在pH10.0以上,屬堿性蛋白質,可以和酸性的DNA緊密結合,而且一般不要求特殊的核苷酸序列。
細胞融合(cell fusion),細胞遺傳學名詞,是在自發(fā)或人工誘導下,兩個細胞或原生質體融合形成一個雜種細胞。基本過程包括細胞融合形成異核體(heterokaryon)、異核體通過細胞有絲分裂進行核融合、最終形成單核的雜種細胞。細胞融合可作為一種實驗方法被廣泛適用于單克隆抗體的制備,膜蛋白的研究。
制備1%瓊脂糖凝膠(大膠用70ml,小膠用50ml):稱取0.7 g(0.5 g)瓊脂糖置于錐形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小燒杯.微波爐加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化,搖勻,即成1.0%瓊脂糖凝膠液。
蘭氏染色和抗酸染色都屬于細菌形態(tài)學檢查法,提到革蘭氏染色大家肯定都非常熟悉,但是說到抗酸染色你不一定了解。今天我們進入細菌的世界,聊一聊細菌界的這兩大染色法:
麗春紅(Ponceau S)也稱猩紅,可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纖維素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷,可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合,同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區(qū)相結合,從而形成紅色的條帶。麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍染色。